[giaban]0.000 VNĐ[/giaban] [kythuat]
[/kythuat]
[tomtat]
[tomtat]
Nghiên cứu đặc điểm gen H5 và N1 của virus cúm A/H5N1 phân lập tại Việt Nam để tạo nguồn nguyên liệu sản xuất vaccine thế hệ mới
MỤC LỤC
MỞ ĐẦU
CHƯƠNG 1. TỔNG QUAN TÀI LIỆU
1.1. ĐẠI CƯƠNG VỀ VIRUS CÚM
1.1.1. Virus cúm và phân loại virus cúm
1.1.2. Đặc điểm tiến hóa tạo nên các phân dòng có độc lực cao của virus cúm A/H5N1
1.1.3 Sự hình thành genotype của virus cúm A/H5N1 trên thế giới và Việt Nam
1.1.4 Biến đổi thành phần gen hemagglutinin (HA) tạo nên các nhóm kháng nguyên (clade) của virus cúm A/H5N1
1.2. ĐẶC ĐIỂM CẤU TRÚC VIRUS CÚM A
1.2.1. Đặc tính cấu trúc chung
1.2.2. Cấu trúc hệ gen của virus cúm A
1.2.3. Chức năng các phân đoạn trong hệ gen
1.3. CẤU TRÖC, CHỨC NĂNG CỦA HEMAGGLUTININ VÀ NEURAMINIDASE
1.3.1. Protein hemagglutinin (HA)
1.3.2. Protein neuraminidase (NA)
1.4. CÁC YẾU TỐ QUYẾT ĐỊNH ĐỘC LỰC
1.5. CÁC PHƯƠNG THỨC BIẾN ĐỔI KHÁNG NGUYÊN
1.5.1. Hiện tượng «lệch kháng nguyên»
1.5.2. Hiện tượng «trộn kháng nguyên»
1.5.3. Hiện tượng glycosyl hoá
1.6. BỆNH CÖM GIA CẦM
1.6.1. Lịch sử bệnh cúm gia cầm
1.6.2. Tình hình bệnh cúm A/H5N1 trên thế giới
1.6.3. Tình hình dịch cúm A/H5N1 ở Việt Nam
1.6.4. Đặc điểm của bệnh cúm gia cầm
1.6.4.1. Triệu chứng - bệnh tích ở cúm gia cầm
1.6.4.2. Triệu chứng bệnh cúm gia cầm ở người
1.6.5. Tính thích ứng đa vật chủ của virus cúm A/H5N1
1.6.6. Cơ chế xâm nhiễm và nhân lên của virus cúm A trong tế bào
1.6.7. Phương thức lây truyền của virus cúm gia cầm
1.6.8. Sức đề kháng của virus
1.7. CÁC LOẠI VACXIN PHÕNG BỆNH CHO GIA CẦM
1.8. MỘT SỐ NGHIÊN CỨU VỀ VIRUS CÖM GIA CẦM A/H5N1 TẠI VIỆT NAM
CHƯƠNG 2. VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.1. ĐỐI TƯỢNG
2.2. NỘI DUNG
2.3. VẬT LIỆU
2.4. DỤNG CỤ, TRANG THIẾT BỊ VÀ HÓA CHẤT NGHIÊN CỨU
2.4.1. Dụng cụ, trang thiết bị
2.4.2. Hóa chất
2.5. QUI TRÌNH NGHIÊN CỨU PHÂN TÍCH GEN H5 VÀ N1 CỦA VIRUS CÚM A/H5N1
2.6. CÁC PHƯƠNG PHÁP SINH HỌC PHÂN TỬ NGHIÊN CỨU GEN VIRUS CÚM A/H5N1
2.6.1. Phương pháp tách chiết ARN tổng số
2.6.2. Phương pháp RT-PCR
2.6.3. Phương pháp điện di kiểm tra và tinh sạch sản phẩm RT-PCR
2.7. PHƯƠNG PHÁP DÕNG HÓA
2.7.1. Nối sản phẩm RT-PCR/PCR vào vector tách dòng
2.7.2. Chuyển nạp sản phẩm dòng hóa vào tế bào khả biến
2.7.3. Chọn lọc, nuôi cấy khuẩn lạc và tách chiết ADN tái tổ hợp
2.7.4. Kiểm tra ADN tái tổ hợp
2.8. PHƯƠNG PHÁP XÁC ĐỊNH TRÌNH TỰ NUCLEOTIDE
2.9. PHƯƠNG PHÁP XỬ LÝ SỐ LIỆU
2.9.1. Xử lý chuỗi trong chương trình Chromas
2.9.2. Chương trình biên tập chuỗi nucleotide SeqEd
2.9.3. Hệ chương trình MacVector
2.9.4. Chương trình so sánh và phân tích chuỗi gen GeneDoc
2.9.5. Chương trình phân tích di truyền tiến hóa phân tử (MEGA)
2.9.6. Xử lý số liệu trong nghiên cứu
CHƯƠNG 3. KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN
3.1. THU NHẬN VÀ LƯU GIỮ GEN H5 CỦA VIRUS CÖM A/H5N1 TRONG VECTOR TÁCH DÒNG
3.1.1. Tách ARN tổng số và thực hiện RT-PCR
3.1.2. Dòng hoá sản phẩm và lưu gen H5 trong vector tách dòng
3.1.3. Giải trình tự và phân tích thành phần amino acid của HA (H5) so sánh về thành phần nucleotide và amino acid với các chuỗi đăng ký trong Ngân hàng gen
3.1.4. Phân tích vị trí điểm cắt protease, bám dính thụ thể, epitope và glycosyl hoá của polypeptide H5 trên cơ sở trình tự amino acid suy diễn
3.1.5. Phân tích tương đồng về nucleotide và amino acid ở H5
3.1.6. Phân tích mối quan hệ phả hệ và nguồn gốc giữa các chủng của Việt Nam và thế giới
3.2. XÁC ĐỊNH CÁC PHÂN NHÁNH NHÓM KHÁNG NGUYÊN (CLADE) XUẤT HIỆN MỚI TẠI VIỆT NAM
3.2.1 Kết quả sự hình thành phân nhóm kháng nguyên mới 1.1 của clade 1
3.2.2 Kết quả sự hình thành phân nhóm kháng nguyên mới của clade 2.3.2 và 2.3.4
3.3. THU NHẬN, GIẢI TRÌNH TỰ VÀ LƯU GIỮ GEN N1 CÁC CHỦNG VIRUS CÚM A/H5N1 TRONG VECTOR TÁCH DÒNG
3.3.1. Thực hiện RT-PCR thu nhận gen N1
3.3.2. Dòng hoá sản phẩm gen N1 trong vector tách dòng
3.3.3. Phân tích thành phần nucleotide và amino acid của gen N1
3.3.3.1. Phân tích thành phần nucleotide gen N1
3.3.3.2. Phân tích thành phần amino aicd gen N1
3.3.4. Phân tích đột biến trượt-xoá gen của N1 qua thời gian tiến hoá
3.3.5. Phân tích mối quan hệ phả hệ gen N1 của các chủng virus cúm A/H5N1 giai đoạn 1996 - 2011
KẾT LUẬN
ĐỀ XUẤT VÀ KIẾN NGHỊ
TÀI LIỆU THAM KHẢO
DANH SÁCH CÁC BÀI BÁO LIÊN QUAN ĐẾN LUẬN ÁN ĐÃ CÔNG BỐ
PHỤ LỤC
Bài viết liên quan
