[giaban]0.000 VNĐ[/giaban]
[kythuat]
[/kythuat]
[tomtat]
[tomtat]
Phân
lập và tuyển chọn chủng vi sinh vật có khả năng thủy phân keratin từ lông vũ
gia cầm và thiết kế vector tái tổ hợp biểu hiện keratinase trong tế bào vi
khuẩn E.Coli
MỤC
LỤC
MỞ
ĐẦU
PHẦN
I: TỔNG QUAN TÀI LIỆU
1.1.
Keratin ..
1.2.
Keratinase
1.3.
Đa dạng vi sinh vật có khả năng sinh keratinase cao
1.4.
Tình hình nghiên cứu
1.4.1
Tình hình nghiên cứu trong nước
1.4.2
Tình hình nghiên cứu trên thế giới
1.5.
Sản xuất và ứng dụng quá trình thuỷ phân keratin trong lông vũ
1.5.1.
Tăng hàm lượng chất dinh dưỡng trong thức ăn gia súc
1.5.2.
Tạo phân bón
1.5.3.
Tạo enzyme trong các ngành công nghiệp
1.5.4.
Cải tạo đất
1.5.6.
Tạo hợp chất màu
1.5.7.
Ứng dụng trong công nghiệp dược và sản xuất thực phẩm chức năng
PHẦN
II: NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP
2.1.
Nguyên liệu
2.1.1.
Nguyên liệu
2.1.2.
Hoá chất
2.1.3.
Thiết bị
2.1.4.
Môi trường nuôi cấy
2.1.4.1.
Môi trường Broth Peptone
2.1.4.2.
Môi trường I
2.1.4.3.
Môi trường II
2.1.4.4.
Môi trường III
2.1.4.5.
Môi trường để phân lập chủng Chryseobacterium
2.1.4.6.
Môi trường nuôi lắc lông vũ
2.1.4.7.
Môi trường MPA
2.2.
Phương pháp nghiên cứu
2.2.1.
Phân lập chủng vi khuẩn có khả năng sinh keratinase cao
2.2.1.1.
Lấy mẫu và đo pH đất
2.2.1.2.
Phân lập chủng vi khuẩn Chryseobacterium
2.2.1.3.
Phân lập chủng vi khuẩn Vibrio
2.2.1.4.
Phân lập chủng vi khuẩn Bacillus
2.2.2.
Xác định khả năng thuỷ phân lông vũ
2.2.2.1.
Nuôi giống cấp 1 vào môi trường MPA
2.2.2.2.
Xác định mật độ tế bào
2.2.3.
Lựa chọn môi trường thích hợp cho các chủng vi khuẩn có khả năng sinh
keratinase cao
2.2.4.
Ảnh hưởng của nhiệt độ và pH lên khả năng sinh trưởng của vi khuẩn thủy phân
lông vũ
2.2.5.
Xác định đặc điểm hình thái của các chủng vi khuẩn
2.2.6.
Xác định gram âm và gram dương của vi khuẩn
2.2.6.1.
Phương pháp Hucker cải tiến
2.2.6.2.
Xác định bằng cách kiểm tra độ kết dính
2.2.7.
Phương pháp phân loại vi khuẩn theo đặc tính sinh hoá
2.2.8.
Chọn dòng gene keratinase vào vector biểu hiện pET32a
2.2.8.1.
Tách chiết DNA tổng số của chủng vi khuẩn
2.2.8.2.
Nhân bản đoạn DNA bằng PCR
2.2.9.
Phân tích hoạt tính keratinase ngoại bào
PHẦN
III: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
3.1.
Kết quả lấy mẫu ở các địa điểm
3.2.
Giá trị pH của các mẫu đất
3.3.
Phân lập và tuyển chọn các chủng vi sinh vật có khả thủy phân keratin
3.4.
Lựa chọn môi trường thích hợp của các chủng được chọn lọc
3.5.
Tối ưu nhiệt độ của các chủng vi khuẩn chọn lọc
3.6.
Đặc điểm hình thái nhóm vi khuẩn thuỷ phân lông vũ
3.7.
Kết quả xác định gram của các chủng vi khuẩn
3.8.
Phân loại các chủng phân lập theo phương pháp sinh hoá
3.8.1.
Phân loại theo kit API 50CHB của chủng vi khuẩn Đ.GT.2.2
3.8.2.
Phân loại theo kit API 20NE của chủng vi khuẩn L.SC.1.2
3.9.
Phân loại theo kiểu gene
3.9.1.
Tách DNA tổng số
3.9.2.
Nhân đoạn gene mã hóa 16S rARN bằng kỹ thuật PCR
3.10.
Chọn dòng gene keratinase vào vector biểu hiện pET32a
3.10.1.
Nhân đoạn gene keratinase bằng kỹ thuật PCR
3.10.2.
Gắn sản phẩm PCR đã thôi gel tinh sạch vào vector tách dòng pET32a
3.10.3.
Biến nạp sản phẩm lai vào tế bào khả biến DH10B
3.10.4.
Tách DNA plasmid tái tổ hợp
3.11.
Đánh giá hoạt tính ezyme dịch thô của chủng chọn lọc
3.11.1.
Định lượng Protein bằng phương pháp Bradford
3.11.2.
Thử hoạt tính enzyme bằng azokeratin
PHẦN
IV: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ
TÀI
LIỆU THAM KHẢO
Bài viết liên quan
